Клинико-иммунологическая эффективность аллоиммунизации (лимфоцитотерапии) лимфоцитами партнера у женщин с синдромом потери плода.

Несмотря на большое количество работ, посвященных исследованию механизмов развития самопроизвольных выкидышей (СВ),  их этиология остается до конца неясной. Многие авторы полагают, что иммунные дисфункции являются одной из возможных причин репродуктивных потерь. Развитие СВ у женщин может быть обусловлено недостаточной продукцией протективных блокирующих факторов (БФ), которые играют важную роль в формировании супрессорного фона, необходимого для успешной имплантации и развития эмбриона. В этом случае для усиления иммунного ответа и повышения продукции БФ используется метод аллоиммунизации (лимфоцитотерапии) лимфоцитами партнера (АИЛ). Вместе с тем данные об эффективности АИЛ как метода профилактики развития самопроизвольных выкидышей противоречивы. В своей работе мы представили результаты иммунотерапии привычного невынашивания с использованием метода аллоиммунизации (лимфоцитотерапии) лимфоцитами партнера  у женщин с низкой продукцией БФ.

Материал и методы.

В исследование было включено  118  женщин с тремя и более самопроизвольными выкидышами в анамнезе в 1-ом триместре беременности (до 14 недель). На момент обследования у женщин были исключены эндокринная патология, гинекологические и аутоиммунные заболевания, пороки развития органов репродуктивной сферы, которые бы могли быть причиной выкидышей. В исследование были включены женщины с низким содержанием БФ в сыворотке крови.

Для дальнейшего анализа все женщины были разделены на 2 группы. В группу 1 (исследуемая группа) вошли женщины, которым проводилась аллоиммунизация (лимфоцитотерапия) лимфоцитами партнера. Группу 2 составили пациенты, которые по разным причинам не получали иммунотерапию и поэтому были отнесены в группу сравнения. Средний возраст женщин в 1-ой и 2-ой группах составил 31,4 ± 0,5  и 32,8 ± 0,6 года соответственно. Для приготовления вакцины у партнера забирали 20 мл венозной крови, мононуклеарные клетки (МНК) выделяли в градиенте плотности фиколла-верографина, собирали, отмывали физиологическим раствором и осаждали. Затем добавляли 1 мл физиологического раствора и клеточную суспензию вводили подкожно в межлопаточную область женщине. Вакцинацию женщины клетками партнера проводили 2-х кратно на 3-7 день цикла в течение 2-х последующих менструальных циклов. После 2-й иммунизации повторно определяли содержание БФ в сыворотке крови женщины. При наличии сывороточных БФ проводили 3-ю завершающую процедуру иммунизации. Женщинам с низким уровнем БФ назначали 2-й курс аллоиммунизации (лимфоцитотерапии), состоящий из 2 процедур. При этом у партнера забирали 40 мл крови, соответственно увеличивалось количество антигенного материала. После окончания 2 курса АИЛ определяли содержание БФ. МНК получали центрифугированием гепаринизированной венозной крови в градиенте плотности фиколла-верографина. Пролиферативный ответ МНК женщин определяли в однонаправленной смешанной культуре лимфоцитов (СКЛ).

Для этого МНК женщины (0,1х10⁶/лунку) культивировали с МНК партнера (0,1х10⁶/лунку), предварительно в течение 1 часа обработанными митомицином С (40мкг/мл). МНК культивировали в течение 120 часов в 96-луночных круглодонных планшетах. Наличии БФ оценивали по сравнению пролиферации МНК женщин в СКЛ в присутствии 10% аутологичной сыворотки  (опыт; О) и 10% интактной сыворотки доноров АВ(IY) группы (контроль; К). Величину БФ выражали в виде индекса супрессорного влияния БФ (ИВбф), рассчитанного по следующей формуле:  ИВбф = О / К. Значения ИВбф менее 0,75 расч.ед. свидетельствовали о наличии в сыворотке крови БФ.

Результаты исследования и обсуждение.

Из 118 женщин с самопроизвольными выкидышами в анамнезе, у которых в сыворотке крови отсутствовали БФ, аллоиммунизация (лимфоцитотерапия) лимфоцитами партнера была проведена 82 женщинам, 36 женщинам терапия не проводилась.

Появление блокирующих факторов после  1-го курса аллоиммунизации (лимфоцитотерапии) было зарегистрировано у 55 из 82 женщин (67%). У 27 женщин отсутствие БФ сохранялось, и таким женщинам был проведен второй курс АИЛ. В результате позитивный эффект был зарегистрирован у 9 из 27 женщин (33%). Таким образом, по завершению 2 курсов АИЛ у 78% женщин регистрировались сывороточные БФ. Для дальнейшего исследования группа 1 была разделена на подгруппы в зависимости от наличия БФ. В подгруппу 1А включили женщин с позитивным результатом лечения (n=64, БФ+), в подгруппу 1В вошли женщины с отсутствием БФ после 2-х курсов АИЛ (n=18, БФ-). При оценке клинической эффективности в указанных группах  учитывали наличие срока  беременности более 20 недель.  Аналогичный опрос был проведен в контрольной группе женщин (группа 2), которым АИЛ не проводилась. После 1 курса АИЛ беременность наступила и прогрессировала у 26 из 55 женщин (47,3%),  после 2 курса у 4 из 9 женщин (44,4%).

В целом по группе 1А у женщин с нормативными значениями БФ клиническая эффективность составила 46,8%. В группе 1В у женщин с отсутствием БФ после иммунизации беременность регистрировалась  у 4 из 18 женщин (22,2%). В контрольной группе женщин (группа 2), которым АИЛ не проводилась, беременность наступила у 6 из 36 женщин (16,6%). Полученные данные показали, что в подавляющем большинстве случаев проведение АИЛ у женщин со спонтанными выкидышами сопровождается появлением в сыворотке крови БФ. Число случаев прогрессирующей беременности было достоверно выше в группе женщин с наличием БФ.

Наши данные согласуются с исследованиями, проведенными Pandy М.К. c cоавторами в США и Nonako Т. с коллегами из Японии, которые также показали высокую эффективность аллоиммунизации (лимфоцитотерапии) лимфоцитами партнера при привычном невынашивании. В то же время  другие исследователи не находят достоверных различий в группе женщин с невынашиванием, которым проводили АИЛ, и контрольных группах [5]. Возможно, данные противоречивые факты обусловлены разным подбором женщин в группы для исследования. В нашей работе, также как в исследованиях Pandy М.К. и Nonako Т., для проведения иммунотерапии отбирали женщин с отсутствием БФ в сыворотке крови. Соответственно результаты лечения оценивали раздельно в группах женщин с наличием и отсутствием БФ. Полученные различия по эффективности АИЛ в группах женщин с наличием и отсутствием БФ после лечения свидетельствует о том, что БФ играют важную роль в поддержании физиологического течения беременности на ранних сроках гестации и препятствуют развитию самопроизвольных выкидышей.

Известно, что физиологическое течение беременности ассоциировано с супрессорной перестройкой Т-клеточного звена иммунной системы, в результате которой доминируют Тh2/противовоспалительные цитокины  и повышается содержание регуляторных CD4+CD25+ Т-клеток. В ряде работ показано, что доминирование Тh2-цитокинов, которое индуцируется  аллоиммунизацией (лимфоцитотерапией), коррелирует с эффективностью терапии. 

Следовательно, представленные данные свидетельствуют о необходимости иммунодиагностики перед проведением аллоиммунизации (лимфоцитотерапии) лимфоцитами партнера и высокой эффективности данного метода иммунотерапии у женщин с синдромом потери плода.

Примечание: * - достоверность различий частоты встречаемости признаков в исследуемых группах по сравнению с группой 1А определяли точным методом Фишера (Ртмф).

 Авторы статьи: 

Н.А. Хонина (Учреждение РАМН НИИ клинической иммунологии СО РАМН),

Е.М. Долгова (ЗАО АНО «Центр Новых Медицинских Технологий в Академгородке»),

А.Е. Белова (ЗАО МЦ «Авиценна»),

Н.М. Пасман (МЦ «Клиника профессора Пасман»),

Е.Р.Черных (Учреждение РАМН НИИ клинической иммунологии СО РАМН)

Полезная информация: